AMR-100酶標(biāo)儀有哪些應(yīng)用
2016-1-14
來(lái)源:未知
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- AMR-100酶標(biāo)儀有哪些應(yīng)用
一、蛋白質(zhì)濃度測(cè)定
可見(jiàn)光吸收法
1.1 Lowry法
1.2 考馬斯亮藍(lán)法（Bradford）
1.3 BCA法
二、細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)
可見(jiàn)光吸收法
2.1 終點(diǎn)法
工作原理：
2.1.1 死細(xì)胞計(jì)數(shù)
-- 染料法：
細(xì)胞死亡后，細(xì)胞膜通透性增高，染料可以透過(guò)。
染料：臺(tái)盼藍(lán)，Cytorecon，PI等。
-- 比色法：
細(xì)胞死亡后，胞內(nèi)物質(zhì)釋放，可在培養(yǎng)基中檢出。
檢測(cè)對(duì)象：51Cr，LDH等
2.1.2 活細(xì)胞計(jì)數(shù)
-- 染料法：
活細(xì)胞的線粒體酶可以還原染料，產(chǎn)生有色產(chǎn)物。
染料：四氮唑鹽類(lèi)（MTT，XTT，WST-1，CCK8/WST-8）等
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm（XTT，WST-1，CCK8/WST-8），490nm或570nm（MTT）
參比波長(zhǎng)：690nm
2.2 動(dòng)力學(xué)法
2.2.1 動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性)
工作原理：
-- 細(xì)胞增殖過(guò)程中，細(xì)胞體內(nèi)的環(huán)境由氧化環(huán)境變化成還原環(huán)境，呼吸鏈中的NADPH/NADP,
FADH/FAD,FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高。
-- AlamarBlue被細(xì)胞內(nèi)吞后，在細(xì)胞質(zhì)中被上述代謝中間體還原，最后釋放到胞外。
-- 被還原AlamarBlue的積累使培養(yǎng)基從無(wú)熒光的靛青藍(lán)轉(zhuǎn)變成有熒光的粉紅色。
檢測(cè)波長(zhǎng)：570nm
參比波長(zhǎng)：600nm
三、細(xì)胞凋亡檢測(cè)檢測(cè)
工作原理：
-- 細(xì)胞凋亡的發(fā)生是由于鈣-鎂依賴(lài)性核酸酶進(jìn)入核小體間切割DNA，產(chǎn)生180~200bp或其數(shù)倍的
核小體片段，而核小體由于與組蛋白形成緊密復(fù)合物而不被核酸內(nèi)切酶切割。
-- 應(yīng)用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體，與核小體片段形成夾心結(jié)構(gòu)，可特異性檢測(cè)細(xì)胞溶
解物中的核小體片段。
檢測(cè)方法：
-- 在微定量板上吸附抗組蛋白抗體，加入細(xì)胞裂解后離心所得的含有核小體的上清液，核小體上
的組蛋白與包被的抗組蛋白抗體結(jié)合；
-- 加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗DNA抗體，與核小體上的DNA結(jié)合；
-- 加酶的底物，測(cè)光吸收值。
檢測(cè)波長(zhǎng)：405nm和492nm
四、報(bào)告基因檢測(cè)
五、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)檢測(cè)
六、活性小分子檢測(cè)
七、內(nèi)毒素檢測(cè)
八、過(guò)敏原檢測(cè)
九、其他酶類(lèi)檢測(cè)
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